Citar como: Cerna-Mendoza, A., Coronado, M.F., Doria-Bolaños, M., García-Gonzales,
P., & Fachin-Ruiz, G. (2021). Formulación
de dieta artificial para la crianza de Spodoptera
frugiperda utilizando insumos de la región de San Martín. Revista
Agrotecnológica Amazónica, 1(2), 40-52. https://doi.org/10.51252/raa.v1i2.103
Recibido: 13/04/2020
Aceptado: 06/07/2020
Publicado: 19/07/2021
Formulación de
dieta artificial para la crianza de Spodoptera
frugiperda utilizando insumos de la región de San Martín
Formulation of artificial diets for the raising of Spodoptera frugiperda using inputs from
the San Martín region
Cerna-Mendoza, Agustín1[0000-0002-4827-9966]; Coronado, Manuel F.1[0000-0002-3263-6869]; Doria-Bolaños, Manuel1[0000-0001-9202-973X]; García-Gonzales, Patricia1[0000-0003-3490-1977] y Fachin-Ruiz, Grecia1[0000-0001-7770-7264]
1Universidad
Nacional de San Martín, Tarapoto, Perú
acerna@unsm.edu.pe
Resumen.
El cogollero del maíz (Spodoptera frugiperda) es la plaga más importante de este cultivo
en la región San Martín, su crianza masiva, para fines de estudiar su biología,
crianza de enemigos naturales y otros, se ve limitada por la falta de insumos;
por esta razón el objetivo del estudio fue evaluar los diferentes parámetros
fisiológicos y biológicos de S.
frugiperda, criada en una dieta artificial elaborada con insumos de la
región. Se utilizó 35 larvas de primer ínstar para cada tratamiento, cada larva
representó una repetición. Para el desarrollo larval, se utilizó una incubadora
a 30±1 °C y fotofase 14h. Se evaluó el porcentaje de viabilidad y la duración
de los diferentes ínstares, peso de pupas y deformaciones; el número de mudas
se determinó midiendo la capsula cefálica de larvas; en adultos se evaluó la
duración del periodo de pre-oviposición, oviposición y post-oviposición, y la
fecundidad bruta. Los resultados sugieren que la dieta ESALQ-modificada es la
más adecuada para la crianza S. frugiperda,
ya que mostró una viabilidad larval de 54,3% y 5 instares, las pupas tuvieron
mayor peso y los adultos presentaron mayor fecundidad (848,2 huevos por
hembra); las pupas sobre la dieta con insumos de la región, presentaron
deficiente quitinización de los primeros segmentos abdominales y 0% de
viabilidad.
Palabras clave: Dieta artificial,
harina de plátano, polvillo de arroz,
S. frugiperda
Abstract. Fall
armyworm (Spodoptera frugiperda) is
the most important pest of this crop in the San Martín region. Its massive
breeding, for the purpose of studying its biology, breeding of natural enemies
and others, is limited by the lack of inputs; for this reason, the objective of
the study was to evaluate the different physiological and biological parameters
of S. frugiperda, raised on an
artificial diet made with inputs from the region. 35 first instar larvae were
used for each treatment, each larva represented a repetition. For larval
development, an incubator was used at 30±1°C and photophase 14h. The percentage
of viability and the duration of the different instars, pupal weight and
deformations were evaluated; the number of molts was determined by measuring
the cephalic capsule of larvae; in adults the duration of the pre-oviposition,
oviposition and post-oviposition period, and gross fertility were evaluated.
The results suggest that the ESALQ-modified diet is the most suitable for
raising S. frugiperda, since it showed a larval viability of 54.3% and 5
instars, the pupae had greater weight and the adults presented higher fecundity
(848.2 eggs per female); the pupae on the diet with inputs from the region,
presented deficient chitinization of the first abdominal segments and 0%
viability.
Keywords: Artificial
diet, banana flour, rice powder, S.
frugiperda
1
Introducción
En la región San Martín son
plagas de gran interés agrícola, el gusano cogollero (Spodoptera sp.) en arroz,
maíz y otros cultivos, el barreno de los tallos (Diatraea sp.) en caña de azúcar, maíz, arroz, y otras poáceas, que
deberían ser conocidas y estudiadas estableciendo módulos de crianza en
ambientes adecuados.
El uso de dietas artificiales
para la crianza de insectos en el país tiene escasos reportes, así podemos
mencionar la crianza de lepidópteros (Spodoptera
sp., y Diatraea sp.), en la costa
peruana y la crianza de mosca de la fruta (Ceratitis
capitata) a través del proyecto “MOSCAMED” como uno de los más importantes,
por su alcance y tecnología utilizados. En tanto, hay insuficientes empresas formalizadas,
que se dediquen a la crianza y/o producción y comercialización de insectos como
ocurre en Europa y algunos países de la región (Brasil, Cuba, Costa Rica,
etc.).
El Perú es uno de los países
pioneros en américa latina donde se implementó el manejo integrado de plagas en
el cultivo del algodonero y pionero en el control biológico, la crianza masal
de Trichogramma spp se implementó en
la década del 50, utilizando técnicas de crianza avanzados para la época y con
asesoramiento de especialistas de la Universidad de California-EUA. Hasta el
2000, se han introducido al país 93 especies benéficas (la mayoría
parasitoides) de las cuales se han establecido 28, y todas ellas cuanto sus
presas y/o hospederos, han sido criadas con dietas naturales y liberadas en
forma inoculativa en cultivos perennes y semiperennes (Valdivieso & Bartra, 2000).
El sistema de crianza utilizado
en algunos centros de investigación (Universidades, Institutos Tecnológicos,
Institutos de Investigación, empresas privadas, etc.) para proveerse de
insectos en sus diferentes estadíos, es alimentándolos con “dietas naturales”,
con las consiguientes desventajas: indisponibilidad del alimento fresco y
oportuno, sobredimensionamiento de jaulas y ambientes debido al volumen de los
mismos y contaminación biológica (entomopatógenos) y química (residuos de
pesticidas); pues los objetivos de tales crianzas son básicamente la
investigación en biología. Así, la crianza de insectos utilizando dietas
artificiales se convierte en uno de los componentes importantes de la
entomología tanto básica cuanto aplicada.
Para la crianza de S. frugiperda, en la ESALQ-USP, Brasil
viene utilizando una dieta patrón compuesta de: frejol, harina de trigo y torta
de soya, agar, vitaminas, sales minerales y antibióticos, insumos escasos y
costosos en nuestra región, por lo que pretendemos, como objetivo del estudio,
reemplazar la harina de trigo por polvillo de arroz, y la torta de soya por
harina de plátano (50%) y harina de maíz suave (50%), existentes en nuestra
región, para la crianza de cogollero.
2
Materiales
y Métodos
Se utilizó equipo básico para la
preparación de las dietas: cocina de 02 hornillas a gas, licuadora, batidora
eléctrica, olla a presión, recipientes graduados de polietileno, pipeteador,
pipetas (10 ml, 1 ml), probeta de 01 l, coladores (10 cm y 20 cm),
refrigeradora, cámara de vacío con luz ultravioleta y luz normal, balanza
analítica de 1000 g, estufa para esterilizar, vasijas plásticas de diferentes
volúmenes, incubadora, destilador de agua, congeladora mediana.
Como fuentes de carbohidratos y
proteínas se empleó: frejol, germen de trigo, levadura, caseína, proteína y
afrecho de soya, solución vitamínica, sales de Wesson, cloreto de colina. Los
insumos regionales incorporados a la dieta artificial, fueron: frejol huasca,
polvillo de arroz (subproducto del pilado de arroz), harina de plátano y harina
de maíz suave. Se preparó una solución vitamínica fortificante recomendada por Parra (1996), compuesta de vitaminas diluidas
en dextrosa (Tabla 1); y también se preparó la dilución de sales de Wesson.
Tabla 1
Fuente: Tomado de Parra (1996) |
La composición de las dietas
patrón (dieta ESALQ-USP) y modificada con insumos de la región utilizadas en la
presente investigación, se muestran en la Tabla 2.
2.1
Establecimiento del módulo de crianza
Se colectaron larvas de Spodoptera frugiperda en cultivos de
maíz y caña de azúcar en distritos de
Tarapoto, Morales y Banda de Shilcayo durante el periodo de marzo-diciembre
2014, para establecer el módulo de cría, los módulos fueron mantenidos con
dieta natural (tallos frescos y hojas de maíz); los adultos de Spodoptera obtenidos de las colectas de
campo fueron manejados en una caja de crianza de (45 cm x 70 cm y 33-53 cm de
altura) (ver Figura 1), acondicionando plántulas de arroz (estadío de
macollamiento) en forma de florero para obtención de posturas y refugio de
adultos, no se suministró alimento adicional para adultos; las posturas fueron
colectadas diariamente y acondicionadas en placas de Petri hasta la eclosión de
las larvas. Las larvas de primer ínstar fueron acondicionadas en tapers de 20
cm x 30 cm con trozos de cogollo de maíz; el cambio de dieta fue interdiario.
Tabla 2
|
Para mantener las colonias, se
utilizó como alimento natural, plantas de maíz, obtenidas de parcelas
instaladas en forma secuencial (siembra mensual durante el periodo marzo 2014 –
marzo 2015) en el distrito de Morales (ciudad universitaria).
Figura 1: Secuencia de manejo del pie de cría de Spodoptera frugiperda: A. Jaula de crianza para manejo de
adultos; B. Macollo de arroz
utilizado como refugio y substrato de postura para adultos. C. Posturas, colecta y
acondicionamiento en placas de Petri. D.
Larvas recién eclosionadas; E.
acondicionamiento de larvas de primer ínstar en tallos frescos de maíz
utilizado como sustrato alimenticio; F
y G. Larvas de cuarto ínstar y pupas
listas para ser acondicionadas en la jaula.
2.2
Preparación de la dieta artificial
El frejol cocinado y frío, se
mezcló con los demás ingredientes (excepto el agar), se agregó agua y se batió
en la licuadora. El agar fue disuelto en forma separada en agua caliente, luego
los dos contenidos fueron mezclados, homogenizados con un agitador eléctrico, y
transferida a los recipientes de crianza (vasos descartables de polipropileno
de 30 ml (altura 45 mm, diámetro superior 35 mm y diámetro inferior 25 mm). Los
anticontaminantes y vitaminas fueron adicionados a la dieta cuando ésta alcanzó
de 60 °C a 65 °C.
2.3
Instalación del ensayo
Se probaron tres dietas
(tratamientos) en un DCA: T1= dieta natural (hojas y tallos tiernos de maíz);
T2= dieta ESALQ-USP, Brasil modificada, compuesta de: frejol, harina de trigo,
torta de soya, levadura, solución vitamínica, ácido ascórbico, ácido sórbico,
nipagin, tetraciclina, agar y agua destilada; T3= dieta modificada con insumos
de la región: se reemplazó la harina de trigo por polvillo de arroz, y la torta
de soya por harina de plátano (50%) y harina de maíz suave (50%).
En cada tratamiento se instalaron
35 larvas de primer ínstar de la primera generación (F1) a 24 horas después de
la eclosión, cada larva constituyó una repetición.
Después de realizar la
infestación, los vasos fueron acondicionados en una incubadora a 30±1 °C hasta
la pupación. En forma interdiaria, se midió la capsula cefálica de 15 larvas
marcadas; en la dieta natural se cambió el alimento interdiario. Se realizó el
sexado de pupas al momento de ser colectadas, según Butt & Cantu (1962) citado por Silveira
Garcia et al. (2014), también se evaluó las deformaciones y peso de
cada una. Luego fueron acondicionadas en jaulas de madera para S. frugiperda. Se formó 05 parejas de
adultos en T1 y T2 respectivamente, para evaluar longevidad y fertilidad.
Las posturas de cada hembra
fueron colectadas en forma diaria, etiquetadas y se contó el número de huevos
por postura (masa).
El desarrollo de larvas se
mantuvo en una incubadora de 110 l marca MMM, modelo FRIOCELL 111 a temperatura
constante 30°C y fotofase 14h; la emergencia de adultos, y la obtención de
posturas fue a temperatura ambiente (24 °C a 28 °C aproximadamente), con
humedad relativa del aire de 70%±10% y fotofase de 14 horas.
3
Resultados
y discusiones
El porcentaje de viabilidad de
larvas en dietas artificiales es muy variable, y los datos reportados en
diferentes experimentos inclusive para las mismas dietas varía; así, la dieta
T2 (dieta ESALQ-USP) utilizada como dieta patrón en el presente experimento con
54,29% de viabilidad, corresponde a la dieta reportada por Greene et al. (1976) modificada por Parra (1996) que fue probada también por Arévalo Maldonado & Zenner de Polanía (2009)
en Colombia donde obtuvieron 100% de viabilidad de larvas en la F1, 86,5% en la
F2 y 76,5 en la F3; y al igual que en el presente estudio una viabilidad de pupas
del 100%. La dieta natural (T1) que consistió de hojas y cogollos frescos de
maíz, alcanzó una viabilidad larval de 71,43%, (Tabla 3), siendo también
inferior a 83,33% reportado por Arévalo Maldonado & Zenner de Polanía.
La dieta T3 fue inviable (viabilidad
larvas 5,71% y viabilidad de pupas 0%). S.
frugiperda, presentó alta mortalidad de larvas en el primer y último ínstar.
En el último ínstar, no se produjo la muda completa, quedando parte de la
exuvia adherida al cuerpo de la larva en el primer y segundo segmento abdominal
(Figura 2, B y C). Sin embargo, dieta natural y ESALQ no alcanzaron
sobrevivencia superior a 75%, preconizada por Singh
(1977, 1983, 1985) como mínimo exigido para considerar a una dieta
adecuada para el desarrollo de un determinado insecto.
Ambas dietas testadas, de acuerdo
a su composición, pueden ser calificadas como merídicas, puesto que contienen
más de un ingrediente de composición desconocida o inadecuadamente definida (Dougherty, 1959), como es el caso frejol
huasca, polvillo de arroz harina de plátano y harina de maíz suave y, por
tanto, constituirse en dietas inadecuadas para el desarrollo y crecimiento del
cogollero del maíz, ya que una dieta nutricionalmente completa en cultivo
axénico, para la mayoría de insectos debe contener todos o la mayor parte de
los siguientes elementos: proteínas o aminoácidos (10 esenciales),
carbohidratos, ácidos grasos, colesterol, colina, inositol, ácido pantoténico,
nicotinamida, tiamina, riboflavina, ácido fólico, piridoxina, vitamina B12, caroteno
o vitamina A, tocoferol, ácido ascórbico, minerales y agua (Vanderzant, 1974).
Figura 2. Pupas de Spodoptera
frugiperda criadas en dos dietas artificiales: A. Pupa normal obtenida en la dieta estándar T2, utilizada en la
ESALQ-USP, Brasil (compuesta de frejol, harina de trigo, torta de soya,
levadura, solución vitamínica, ácido ascórbico, ácido sórbico, nipagin,
tetraciclina, agar y agua destilada); B,
C. Pupas con deficiente
quitinización de los primeros segmentos abdominales (nótese las flechas),
obtenidas en dieta modificada con insumos de la región, donde se reemplazó la
harina de trigo por polvillo de arroz, y la torta de soya por harina de plátano
(50%) y harina de maíz suave (50%) (T3).
El peso de pupas en dieta natural
(T1) y en la dieta ESALQ-USP (T2), fue de 0,147 g y 0,197 g respectivamente
(Tabla 3), valores parecidos al T2, encontró Arévalo
Maldonado & Zenner de Polanía (2009) (0,16 - 0,21g). Las pupas
obtenidas en T3 (dieta modificada), mostraron falta de quitinización en los
primeros segmentos abdominales (deformación apreciada en la Figura 2, B y C);
de algunas pupas deformes, emergieron también adultos deformes (Figura 5 D). El
porcentaje de deformación fue de 100% en pupas y adultos.
S. frugiperda, presenta dimorfismo sexual en
estado de pupas tal como se observa en la Figura 3, lo que permitió formar las
parejas con pupas de la misma edad para la evaluación de adultos.
Figura 3. Dimorfismo sexual en pupas de Spodoptera frugiperda; obsérvese el
orificio urogenital de las hembras en el octavo y en machos en el noveno
segmento abdominal.
3.1
Estados de desarrollo S. frugiperda
Tabla 3
(*) T1: Dieta natural compuesta
de hojas y tallos frescos maíz; T2: Dieta testigo utilizada en la ESALQ-USP,
Brasil, compuesta de frejol, harina de trigo, torta de soya, levadura,
solución vitamínica, ácido ascórbico, ácido sórbico, nipagin, tetraciclina,
agar y agua destilada; T3: Dieta artificial modificada con insumos de la
región, donde se reemplazó la harina de trigo por polvillo de arroz, y la
torta de soya por harina de plátano (50%) y harina de maíz suave (50%). |
La figura 4, muestra el número de
estadíos para los dos primeros tratamientos (T1 y T2), el tratamiento T3, con
insumos modificados no fue considerado porque presentó alta mortalidad de
larvas en el primer ínstar. S. frugiperda,
presentó 6 estadíos para ambos tratamientos, con una pequeña diferencia, las
larvas fueron más vigorosas en la dieta artificial, como se aprecia en el
gráfico, en el último estadio, el ancho de la cápsula cefálica fue mayor a 2,5 mm,
mientras que en la dieta natural fue menor a 2,5 mm, por tanto, también dieron
origen a pupas de mayor peso, como se aprecia en el Tabla 3 y a adultos más
fecundos.
Figura 4. Distribución de frecuencia del ancho de capsula cefálica de Spodoptera frugiperda desarrollada en
dieta natural (T1) y en la dieta artificial utilizada en la ESALQ-USP, Brasil
(compuesta de frejol, harina de trigo, torta de soya, levadura, solución
vitamínica, ácido ascórbico, ácido sórbico, nipagin, tetraciclina, agar y agua
destilada) (T2). Las zetas, indican el número de mudas (i1=instar 1; i2=instar
2; i3=instar 3; i4=instar 4; i5=instar 5; i6=instar 6).
En la dieta modificada (T3) con
insumos de la región, se observó un alargamiento de la fase larval, y alta
mortalidad en los estadios 4 y 5 (Figura 5, B y C).
Figura 5. Efecto de la dieta artificial modificada con
insumos de la región, donde se reemplazó la harina de trigo por polvillo de arroz, y la torta de
soya por harina de plátano (50%) y harina de maíz suave (50%) sobre Spodoptera
frugiperda: A. Larva con desarrollo
normal, obtenida en la dieta estándar utilizada en la ESALQ-USP, Brasil (compuesta de frejol, harina de trigo, torta
de soya, levadura, solución vitamínica, ácido ascórbico, ácido sórbico,
nipagin, tetraciclina, agar y agua destilada); B,C. Larvas de último estadio y pre-pupa muertas; D. Adulto emergido con deformaciones.
Villa Castoreña
& Catalán Valencia (2004) al determinar
el número de estadios de esta misma especie criada con hojas y tallos de maíz,
encontraron un máximo de 5 estadios, y un ancho cefálico promedio para el
quinto ínstar de 2,77 mm; mientras que Arévalo
Maldonado & Zenner de Polanía (2009) encontraron en promedio de seis
a ocho estadíos utilizando la misma dieta ESALQ. Por otra parte, Murúa et al. (2003) obtuvieron hasta 10 en
una dieta a base de arroz, fécula de maíz y germen de trigo. Frente a ello, Kester & Smith (1984) mencionan que la nutrición
en los insectos influye en la duración de los diferentes estadíos (número y
tiempo), mortalidad y desempeño reproductivo (fecundidad).
3.2
Fase de adultos
La duración del ciclo biológico
de S. frugiperda se muestra en la
Tabla 4, en la dieta natural (T1) y en la dieta artificial ESALQ-USP (T2), fue
de 36,74 y 38,56 días respectivamente, sin diferencia para la fase de huevo y
pupa, en dieta natural, las fases de larva y preoviposición, fue menor mientras
que las fases de oviposición y post oviposición fueron mayores que en la dieta
ESALQ. Los valores son análogos a los encontrados por Arévalo Maldonado & Zenner de Polanía (2009).
Tabla 4
(*) T1: Dieta natural compuesta
de hojas y tallos frescos maíz; T2: Dieta testigo utilizada en la ESALQ-USP,
Brasil, compuesta de frejol, harina de trigo, torta de soya, levadura,
solución vitamínica, ácido ascórbico, ácido sórbico, nipagin, tetraciclina,
agar y agua destilada; T3: Dieta artificial modificada con insumos de la
región, donde se reemplazó la harina de trigo por polvillo de arroz, y la
torta de soya por harina de plátano (50%) y harina de maíz suave (50%). (**) ± Desviación estándar del
error. |
Como se mencionó para los
estadios de larvas y pupas, la mortalidad del T3 fué alto, los adultos murieron
al momento de la emergéncia o recién emergidos, en tanto también se observó
mortalidad de parejas copulando en el tratamiento T2.
La fecundidad bruta (Mx) para
hembras criadas en dieta natural (T1) y en la dieta artificial ESLAQ-USP (T2)
fué de 388,4 y 848,2 huevos por hembra respectivamente (Figura 6), valores
parecidos a los reportados por Arévalo Maldonado
& Zenner de Polanía (2009) en las mismas dietas con 743 y 905,8
huevos por hembra respectivamente.
Producir insectos de calidad, es
el objetivo final de los laboratorios destinados a éste fin; la calidad de
insectos dependiendo del objetivo de las crianzas debe ser monitoreado
permanentemente, en Europa por ejemplo, para las crianzas masales con fines de
control biológico existe una serie de normas padronizadas, desarrolladas en
alianza con la Organización Internacional de Control Biológico (IOBC) y
empresarios de biocontrol para testes de calidad en crianzas de diversos
enemigos naturales utilizados en cultivos protegidos.
Así, la calidad está relacionada
con la razón sexual, fecundidad, longevidad, predación, tamaño de adulto,
actividad de vuelo y desempeño en campo (van
Lenteren, 1993). El peso de adultos, está a su vez relacionado
directamente con el peso de las pupas al día siguiente de su formación (Bustillo, 2019).
Figura 6. Fecundidad bruta para Spodoptera frugiperda desarrollada en dieta natural (T1) y en la
dieta artificial utilizada en la ESALQ-USP, Brasil (compuesta de frejol, harina
de trigo, torta de soya, levadura, solución vitamínica, ácido ascórbico, ácido
sórbico, nipagin, tetraciclina, agar y agua destilada) (T2).
S. frugiperda, es un lepidóptero cuyo imago
puede vivir en promedio de 7 a 8 días, sobreviviendo en éste estado de los
nutrientes almacenados en sus tejidos gordurosos; tal como afirma Chapman (1982) que es bastante evidente en
adultos de Lepidoptera que no se alimentan. En estos casos los procesos
metabólicos del adulto dependen de las reservas de los estadios inmaduros.
Larvas de Anthonomus grandis
(Coleoptera) almacenan colina e inositol suficientes para permitir el
desarrollo del huevo, mismo si estos nutrientes fuesen excluidos de la dieta
del adulto.
Según la bibliografía consultada,
para la cría experimental de S.
frugiperda se emplea diversidad de dietas artificiales; la mayor parte de
estas son elaboradas teniendo como base harinas de frejol, soja, maíz, alfalfa,
germen de trigo, entre otros, adicionadas con distintos complejos vitamínicos e
importantes cantidades de agar de alta pureza y de elevado costo (Burton, 1969; Burton & Perkins, 1989; Perkins,
1979; Singh, 1985; Valverde et al., 1995).
4
Conclusiones
La dieta
artificial T2, utilizada en la ESALQ-USP, Brasil, compuesta de frejol, harina
de trigo, torta de soya, levadura, solución vitamínica, ácido ascórbico, ácido
sórbico, nipagin, tetraciclina, agar y agua destilada, fue adecuada para el
desarrollo de S. frugiperda. Esto
permitió su desarrollo larval, con una viabilidad y duración semejante a la
dieta natural. Los adultos, tuvieron una fecundidad igual al doble de aquellos
provenientes de dieta natural y, además, fueron ligeramente más grandes y
vigorosos; del mismo modo, las larvas presentaron mayor tamaño de capsula
cefálica y las pupas tuvieron mayor peso promedio que aquellas provenientes de
dieta natural.
La dieta
modificada (T3) con insumos de la región, prolongó el ciclo larval de S. frugiperda y presentó alta mortalidad
para el primer y último instar larval, y las pupas presentaron deficiente
quitinización de los primeros segmentos abdominales, malformación que conllevó
a la muerte de las mismas y algunos adultos que consiguieron emerger,
presentaron deformaciones (alas principalmente) y murieron a pocas horas de la
emergencia.
Agradecimientos
Los autores
agradecen al Instituto de Investigación y Desarrollo de la Universidad Nacional
de la San Martín (UNSM-T) por el financiamiento y acompañamiento de la
ejecución de la investigación.
Al
laboratorio de Entomología de la Facultad de Ciencias Agrarias, por brindar la
infraestructura y todas las facilidades para la ejecución del presente trabajo.
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Conflicto
de intereses
Los autores declaramos que no existen conflictos de interés.
Contribuciones
de los autores
Cerna-Mendoza, Agustín: Coordinación del proyecto y experimentación.
Coronado, Manuel F. y Doria-Bolaños, Manuel: Redacción y parte
metodológica.
García-Gonzales, Patricia y Fachin-Ruiz, Grecia: Análisis estadístico e
interpretación.